關于內毒素檢測，你需要知道的那些事！

什么是細菌內毒素？

細菌內毒素系指細菌的死體或細菌代謝物，細菌內毒素的主要成分是產生革蘭素陰性菌細胞外壁層的脂多糖類物質，其活性主要源于其結構中的類脂A。細菌內毒素廣泛存在于自然界中，各種細菌的內毒素大致相同，可以引發熱，微循環障礙，內毒素休克及播散性血管內凝血等。因此，生物制品類，注射用藥劑，抗生素疫苗類等制劑以及醫療器材類必須經過細菌內毒素檢測試驗，合格后才能使用。

內毒素的生物學活性 

內毒素對機體可產生致病作用 ，它作為外源性 致 熱 原作 用 于 粒 細 胞 和 單 核 細 胞 等 ，使 之 釋 放 內源性致熱原 ，引起發熱；它可激活血管活性物質的釋放 ，使末梢血管擴張，通透性增高 ，靜脈回流減少，心臟輸出量減低 ，導致低血壓并發生休克；因組織供血不足缺氧，導致代謝性酸中毒；同時，它可活化凝血因子Ⅻ ，導致彌漫性血管內凝血 (dissemina— tedintravascularcoagulation，DIC)；此 外 內毒 素 還 可 引起 施 瓦 茲 曼 現 象 (Shwartzmanphenomenon)。另 一 方 面 它 又 可 發 揮 諸 多對機體有益的生物學活性 ，適 量的 內毒素可增強機體 非特 異性免疫的作用，能夠抗感染 、抗輻射 ，并能夠增強 網狀 內皮細 胞 的 活 力 ，并 具 有使 腫瘤 壞 死 消 退 的 活 性 。

內毒素檢測技術的現狀

目前 較 為常 用 的 內 毒 素 檢 測 方 法 多基 于 LAL 測 定 之 上 。鱟 是 一 種 海 洋 生 物 ，其 血 細 胞 內含 有 對 內毒 極 其 敏 感 的凝 血 系 統 ，鱟試 驗 是 根 據 鱟 血 提 取 液 能被 皮 克 (pg)水平 的 內 毒 素 凝 膠 化 的原理 ，通過檢測凝膠的形成來檢測 內毒 素。我國藥典 規定 的 細 菌 內毒 素 定 量 測 定 法 為 濁 度 法 (TurbidimetricTechnique) 和 顯 色 法，除 此 之 外 內毒 素 檢 測 還 有 凝 膠 法 。

                                                     1 凝 膠 法   

本方 法主 要是待 檢 樣 品和 鱟試劑 各 0．1ml混 合 。37℃ 、6O分 鐘 反 應 后 ，18Omin倒轉 ，根 據 凝 膠 形 成 的情 況 判 定 的一種半定 量法。此法操作 比較簡單 、經濟 ，而且 不 需要 儀 器 。0．03-EU／ml的 范 圍 內進 行 半定 量 測 定 。

                                                              2 濁 度 法   

根 據 內 毒 素 與 鱟試 劑 的 C 因 子 發 生 反 應 ，由 內 毒 素 引 發 激 活 的 凝 固 酶 ，切 斷 凝 固 蛋 白原 中 的精 氨 酸 肽 鏈 ，形 成凝 固蛋 白從而產 生凝膠過 程 中的濁度變化 ，是用濁度儀定 量 的 方 法 ，此 法操 作 比 較 簡 單 、經 濟 ，靈敏 度 較 高 ，檢 測 范 圍 較 大 (0．006—300EU／m1)。根 據 測 定 原 理 的 不 同 又 可 分 為 終 點 法 (EndopointTurbidimetricMethod)和 動 態 法 (KineticTurbidi metricMethod)。終 點 濁 度 法 是 根 據 到 達 規 定 時 間 點 上 反 應 液 的 終 濁 度 值 與 細 菌 內毒 素 濃 度 成 比 例 的 關 系 的 一 種 檢 測 方 法 。動 態 濁 度 法 是 根 據 測 定 到 達 事 先 設 定 的 反 應 液 的 濁度 變 化 所 需 要 的 時 間 的對 數 值 與 細 菌 內毒 素 濃 度 的 對 數 值 成 反 比例 關 系 的 一種 分 析 方 法 。本 方 法 因 有 配 套 儀 器 而 較 為 廣 泛 地 應 用 于 藥物 檢 測 及 臨 床 。

                                                             3 比 色 法  

根 據 被 測 內毒 素激 活 的 凝 固酶 水 解 外 加 鱟 三 肽 (如 ：B0C—IEU—GIY—ARG-PNA 等 )中 的 精 氨 酸 肽 鏈 ，釋 放 出 黃 色 的對 硝 基 苯 胺 (PNA)，用 冰 醋 酸 終 止 反 應 進 行 吸 光 度 測 定 ，或 用 游 離 的 PNA 和 偶 氮 試 劑 反 應 ， 終 形 成 紅 色 的 偶 氯 藍 復 合 物 而進 行檢 測 的 一 種 方 法 。它 也 分 為終 點 法 和 動 力 學 法 。此 法 操 作 較 復 雜 ，但 靈 敏 度 和 精 密 度 都 較 高 ，目前 也 較 為 常 用 。
   

                                                     4 酶 聯 免疫 吸 附 測 定 法 

主 要是 利 用 內 毒 素 作 為外 源 性 致 熱 原 的 生 物 學 活 性 ，通 過 對 內毒 素刺 激 巨噬 細 胞 后 產 生 的 內源 性 致 熱 原 (如 TNF，IL一1等 )進 行 檢 測 ，從 而 對 內毒 素進 行定 量檢 測 。
 

                                                  5 流 式 細 胞 術(flow cytometry)

是 應 用 針 對 內 毒 素 表 面抗 原 決 定 簇 的 單 克 隆抗 體 (如 抗 LPS單 克 隆 抗 體 )對 內毒 素 進 行 熒 光 標 定 而 后 應 用 流 式 細 胞 儀 進 行 檢 測 的 一 種 方 法 。本 方 法 不 同于 其 它 方 法 之 處 在 于 它 所 測 定 的 是 內 毒 素 的 量 而 不 是 活 性 。

                                                   6 化學發光測定法

應用 CR1 和 CR3受 體 誘 導 中性 粒 細 胞 的 氧 化 反 應 作 為 一 個 反 應 平 臺 ， 通過 測定 內毒素對 中性 粒細胞 的 生物學作 用來 檢測 內毒素 的水平 。

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