BD CBA流式液相多重蛋白定量技術(shù)

在生物醫(yī)學(xué)研究中，液相蛋白定量檢測是不·可或·缺的環(huán)節(jié)。然而，傳統(tǒng)檢測技術(shù)大多只能針對(duì)單一指標(biāo)進(jìn)行分析，若需同時(shí)檢測多個(gè)指標(biāo)，則需大量樣本分批檢測，操作繁瑣且各指標(biāo)間差異較大。對(duì)于樣本量較少或需對(duì)比各指標(biāo)的研究者而言，傳統(tǒng)技術(shù)難以滿足需求。例如，在細(xì)胞培養(yǎng)上清或血清中，細(xì)胞因子含量較低，常低于常規(guī)檢測方法的下限，使用Western Blot等常規(guī)蛋白檢測方法難以奏效。為此，BD-Pharmingen公司開發(fā)了一種基于流式細(xì)胞儀的液相蛋白定量技術(shù)——CBA（Cytometric Bead Array，細(xì)胞因子微球檢測技術(shù)），為這一難題提供了有效解決方案。

CBA技術(shù)原理CBA是一種基于流式細(xì)胞檢測系統(tǒng)的多重蛋白定量檢測方法，可同時(shí)對(duì)單個(gè)樣品中的多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行檢測。BD公司借助流式細(xì)胞儀對(duì)熒光信號(hào)具有級(jí)數(shù)放大的特性，將待測的可溶性因子附著于近似細(xì)胞直徑的微粒上，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中多種可溶性因子的檢測。其基本原理與ELISA相似，通過微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細(xì)胞儀檢測類似“三明治"結(jié)構(gòu)的顆粒——待測物復(fù)合體所散發(fā)的熒光，進(jìn)而測定待測物的數(shù)量。

在CBA檢測過程中，每個(gè)微球大小一致，帶有特定熒光強(qiáng)度，并包被有特異性捕獲抗體，為待測物提供類似ELISA孔板的捕獲表面。當(dāng)微球與待測樣品溶液混合后，微球上的特異性抗體與樣品中的相應(yīng)抗原或蛋白結(jié)合，隨后加入熒光標(biāo)記的檢測抗體，形成“三明治"夾心復(fù)合物。通過流式細(xì)胞儀，CBA可對(duì)特異性目的蛋白進(jìn)行檢測。每種微球攜帶不同強(qiáng)度的紅色熒光，通過流式細(xì)胞儀的FL3通道檢測微球熒光強(qiáng)度差異實(shí)現(xiàn)目的蛋白的定性；檢測抗體帶有PE熒光素標(biāo)記，在FL2通道檢測，通過檢測抗體的PE熒光強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)目的蛋白的定量。

CBA技術(shù)特點(diǎn)CBA融合了ELISA和細(xì)胞流式技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，是一種先進(jìn)的液相蛋白檢測技術(shù)。與ELISA相比，CBA的捕獲微球呈懸浮態(tài)，能更高效地捕獲被分析物；同時(shí)，它還具備流式細(xì)胞儀寬范圍熒光檢測的特點(diǎn)，對(duì)樣本需求量少，檢測快速且準(zhǔn)確。以下是CBA的主要技術(shù)特點(diǎn)：

1.多重檢測能力：CBA最多可同時(shí)對(duì)一個(gè)樣本中的75個(gè)目的蛋白進(jìn)行定量，大大提高了檢測效率，滿足了復(fù)雜樣本分析的需求。

2.樣本需求量少：僅需50μL溶液即可進(jìn)行一次檢測，這對(duì)于樣本量有限的研究具有重要意義，減少了樣本采集的困難和成本。

3.高靈敏度、寬檢測范圍和良好重復(fù)性：CBA的分析靈敏度高達(dá)2.8pg/mL，檢測范圍可達(dá)0-5000pg/ml，所有分析只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線。這種技術(shù)通過抗體的熒光強(qiáng)度對(duì)目的蛋白定量，避免了ELISA中酶聯(lián)放大可能產(chǎn)生的假陽性結(jié)果，提高了檢測的準(zhǔn)確性和可靠性。

4.靈活的檢測對(duì)象組合：傳統(tǒng)的CBA試劑盒通常包含固定的6個(gè)指標(biāo)，形式較為固定。為了滿足不同客戶的實(shí)際需求和研究興趣，BD公司在2005年初推出了CBA Flex Set。這一創(chuàng)新改變了傳統(tǒng)CBA試劑盒的固定形式，使其成為自由組合、靈活搭配的“自助餐"。研究者可以根據(jù)需要組合不同的捕獲微球來檢測多個(gè)指標(biāo)，最多能同時(shí)檢測75個(gè)指標(biāo)。除了繼承CBA試劑盒的優(yōu)勢(shì)外，CBA Flex Set還配備了獨(dú)立的軟件分析系統(tǒng)（CBA Flex Set Analysis Software），并且可以在BD FACSArray Bioanalyzer上直接使用96孔和384孔板進(jìn)行操作。這種靈活性賦予了研究者更大的選擇空間，進(jìn)一步豐富了CBA產(chǎn)品線，涵蓋了免疫、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞凋亡等多個(gè)領(lǐng)域的蛋白定量分析。

5.操作簡便，省時(shí)省力：CBA技術(shù)采用芯片式集成測定，所有檢測只需一組標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出每種待測蛋白的濃度。操作流程簡單，整個(gè)檢測過程僅需3.5小時(shí)，可對(duì)樣本進(jìn)行實(shí)時(shí)分析，顯著縮短了檢測時(shí)間，提高了檢測效率，使研究人員能夠更快速地獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果，加速研究進(jìn)程。

總之，CBA技術(shù)以其多重檢測能力、低樣本需求、高靈敏度、寬檢測范圍、良好重復(fù)性、靈活的檢測對(duì)象組合以及簡便的操作流程等優(yōu)勢(shì)，為液相蛋白定量檢測領(lǐng)域帶來了革新，為生物醫(yī)學(xué)研究提供了強(qiáng)大的技術(shù)支持。

產(chǎn)品應(yīng)用
自CBA上市以來，越來越多的科研和臨床研究人員將CBA應(yīng)用于他們的領(lǐng)域。CBA應(yīng)用領(lǐng)域涉及眼淚、血清、唾液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等樣本中細(xì)胞因子、炎癥因子的水平的分析。CBA還用于細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中磷酸化蛋白、凋亡相關(guān)蛋白分析，系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）和新生兒膿血癥等免疫疾病的監(jiān)控，腫瘤研究，藥物對(duì)病人的治療效果評(píng)估，藥物研發(fā)，疫苗研究，總體免疫功能分析等多領(lǐng)域。

CBA產(chǎn)品信息見下表:

2 現(xiàn)有CBA Flex Set產(chǎn)品